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原标题:彗星法DNA损伤分析试剂盒,快速灵敏测试 2 W5 z% ^" W. R. h; j$ H4 [( z
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彗星检测试剂盒(3孔载玻片)是一种单细胞凝胶电泳检测(SCGE),用于检测细胞中DNA损伤的快速灵敏测试。其原理是,在器官或组织遭受(如辐射、重金属等)后,细胞中的单链或双链DNA断裂,将细胞与融化的琼脂混合并放在玻片上,然后用裂解溶液破坏细胞膜,用碱性溶液解开DNA。最后,对样品进行电泳,在电场的作用下,正常细胞的大分子DNA迁移较短的距离,完整的DNA保留在细胞核的范围内,DNA碎片从细胞核中迁移出来,用PI染料染色,在荧光显微镜下观察,完整的脱氧核糖核酸形成圆形或微辫状;DNA碎片形成彗星状图案。根据电泳缓冲液的pH值,可分为中性彗星试验(pH=8.4)和碱性彗星试验(pH>13)。中性彗星法主要用于检测DNA双链断裂损伤,碱性彗星法具有较高的灵敏度,可用于检测较少的单链和双链断裂损害。
) \0 y9 p+ W3 l% n% U- h( z 艾美捷彗星法DNA损伤分析试剂盒:
( u* |1 }7 q0 o: G6 I3 ]7 ~ 目录号:D-AKE3040
- [$ T$ j% k2 e6 F 尺寸:15T
+ u- \0 ]1 r, D 储存:在4°C下储存6个月,避光
* G& q7 E2 M2 Y9 l/ p6 J2 p: `+ v 彗星法DNA损伤分析试剂盒(3孔载玻片):
Q0 t! a+ R d% |$ p. z 套件组件尺寸(15T)储存条件 ) k$ J$ Z' G/ D; o: E
彗星载玻片(3孔)5 4℃ 8 _4 ]2 G! f/ V# r$ p
10×赖氨酸溶液15 mL 4℃
7 P2 F3 k5 w% ?: o. T EDTA(500 mM)25 mL 4℃ 5 L# M' D8 l: r0 `( }- C+ Q4 F
琼脂(低熔点)15 mL 4℃
. T" ~4 k7 C9 S) k! } 碘化丙啶(PI)(50x)20μL 4℃,避光 $ \8 l5 V' H9 v5 B5 } q2 \
40 mM Tris-HCl(pH 7.5)15 mL 4℃
5 y; J$ o. S7 \ 彗星法DNA损伤分析试剂盒试剂准备: 2 z& u( Y8 B% \$ R+ @! u2 J3 }
彗星幻灯片(3孔):随附随用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。10×赖氨酸溶液:供应即用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。EDTA(500mM):供应时即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为4℃。
0 q5 |# h4 R& a- [ 琼脂(低熔点):将琼脂(低沸点)瓶在90-95°C的水浴中加热20min,直到琼脂液化。将瓶子转移到37°C水浴中20分钟以保持液态。将其余部分等分并在4℃下储存。 ' z8 E2 J5 o" k- }% u
碘化丙啶(PI)(50×):使用前新鲜制备,用PBS稀释50倍至1×PI染料浓度,在4°C下储存并避光。 % Y) _- ~$ {% f: p) Y
40 mM Tris-HCl(pH 7.5):在使用前制备,用PBS稀释100倍至0.4 mM Tris-HCl(pH7.5)的浓度,并在4°C下储存。 / p! H% S( ^# Y
1×裂解缓冲液:制备100 mL 1×裂解液 ' A* Y9 D L6 u
可以使用以下方法之一测量尾力矩: + ~' y2 a" q6 I2 k- a( C
(a) 橄榄尾力矩=尾DNA%×尾力矩长度(从头部中心到尾部中心测量,见图1) ' X. g/ W/ H0 P. a2 A5 R
(b) Extent Tail Moment=Tail DNA%×Tail Length(见图1)彗星测定结果分析软件可通过Opencomet、CASPlab和彗星测定IV(PerceptiveInstruments)等获得。
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2 @6 L* _3 k$ O 图1:彗星试验中的DNA损伤。 9 m# U( \! m) H# @6 {
图2:定性方法:DNA损伤按尾DNA%的比例分为五级 : E$ F/ z0 o2 E, W* n; a* U1 j
该试剂仅用于科学研究领域,不适用于临床诊断或其他用途。返回搜狐,查看更多
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9 l {2 B0 e# N% d7 v 责任编辑:
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