|
0 Q! U4 _3 e5 G) f' D9 [) {( T
原标题：彗星法DNA损伤分析试剂盒，快速灵敏测试 ( {+ G7 S) A+ `6 E# Z3 |! W& b
' t0 j3 ~: j: ]) h o' T 彗星检测试剂盒（3孔载玻片）是一种单细胞凝胶电泳检测（SCGE），用于检测细胞中DNA损伤的快速灵敏测试。其原理是，在器官或组织遭受（如辐射、重金属等）后，细胞中的单链或双链DNA断裂，将细胞与融化的琼脂混合并放在玻片上，然后用裂解溶液破坏细胞膜，用碱性溶液解开DNA。最后，对样品进行电泳，在电场的作用下，正常细胞的大分子DNA迁移较短的距离，完整的DNA保留在细胞核的范围内，DNA碎片从细胞核中迁移出来，用PI染料染色，在荧光显微镜下观察，完整的脱氧核糖核酸形成圆形或微辫状；DNA碎片形成彗星状图案。根据电泳缓冲液的pH值，可分为中性彗星试验（pH=8.4）和碱性彗星试验（pH>13）。中性彗星法主要用于检测DNA双链断裂损伤，碱性彗星法具有较高的灵敏度，可用于检测较少的单链和双链断裂损害。 ) W8 C2 V/ a( C* d/ b
艾美捷彗星法DNA损伤分析试剂盒：
) b' J! T# Z5 n% a8 ] 目录号：D-AKE3040
6 R0 \/ a( S1 | 尺寸：15T 1 z3 }4 O* O: O- d& ~8 _% h, N
储存：在4°C下储存6个月，避光 ' p9 b& N6 E$ _5 L i: }
彗星法DNA损伤分析试剂盒（3孔载玻片）:
/ s1 D. S1 i! z+ X! W 套件组件尺寸（15T）储存条件 2 K% `& c7 }5 y1 d' S& y* P- l
彗星载玻片（3孔）5 4℃ 0 B4 j! | f- Z# D
10×赖氨酸溶液15 mL 4℃
4 c& k( E u& ^, A) w% w EDTA（500 mM）25 mL 4℃ ( j) ]- Y2 g3 _% w# G5 N3 I
琼脂（低熔点）15 mL 4℃
- b- d* p' h; ]: q. p& Z; h/ _ 碘化丙啶（PI）（50x）20μL 4℃，避光
5 S. n0 p5 y/ j7 y; O2 g5 \ 40 mM Tris-HCl（pH 7.5）15 mL 4℃
/ l, ?& K# f, F0 x8 q- b 彗星法DNA损伤分析试剂盒试剂准备： ' i8 O* I9 a; q7 ~
彗星幻灯片（3孔）：随附随用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。10×赖氨酸溶液：供应即用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。EDTA（500mM）：供应时即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为4℃。 : d1 m$ W8 }$ u( t& D$ B( R
琼脂（低熔点）：将琼脂（低沸点）瓶在90-95°C的水浴中加热20min，直到琼脂液化。将瓶子转移到37°C水浴中20分钟以保持液态。将其余部分等分并在4℃下储存。
/ l# A4 h: Y7 k 碘化丙啶（PI）（50×）：使用前新鲜制备，用PBS稀释50倍至1×PI染料浓度，在4°C下储存并避光。
8 N* _- g: \! }- F: K) [, U 40 mM Tris-HCl（pH 7.5）：在使用前制备，用PBS稀释100倍至0.4 mM Tris-HCl（pH7.5）的浓度，并在4°C下储存。 5 L. X( W! U6 i, `
1×裂解缓冲液：制备100 mL 1×裂解液
" `4 M* k6 J/ ~3 b# y O 可以使用以下方法之一测量尾力矩： & c2 c4 k: G/ t1 a: o2 g
（a） 橄榄尾力矩=尾DNA%×尾力矩长度（从头部中心到尾部中心测量，见图1） & S* p/ s: p1 d
（b） Extent Tail Moment=Tail DNA%×Tail Length（见图1）彗星测定结果分析软件可通过Opencomet、CASPlab和彗星测定IV（PerceptiveInstruments）等获得。 6 [6 z1 b' O- i( B* m& u
- f1 a' b6 b- P3 D8 x8 I6 A6 s 图1：彗星试验中的DNA损伤。
- l* h& u' M/ x, {/ G1 g& ` 图2：定性方法：DNA损伤按尾DNA%的比例分为五级
; B8 S$ A$ G* i1 T' U+ G' | 该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。返回搜狐，查看更多
6 q( ]7 }! ?9 q6 W$ l1 z
5 }+ H: x( W+ E1 k 责任编辑：
0 o3 g2 r& j& x; E9 f4 J4 ~- j% _4 J! S. M1 e3 q3 y4 Q8 x
% V/ _. g% W5 v& Y
& Z- ?- E" g2 b/ _3 H8 M1 j$ y! j
/ [, U, [% U& x | 
